7-AAD 7-氨基放線菌素 D是用于檢測細胞凋亡的試劑，7-氨基放線菌素D（7-AAD）是一種非滲透性染料，可用于鑒定死細胞。染料可以進入具有受損質膜或受損/無細胞代謝的細胞。 一旦進入細胞內，染料與細胞內DNA結合，產生高度熒光的結合物，這些結合物將細胞鑒定為無活力。 它廣泛用于流式細胞術。 7-AAD可以被488nm激光氬激光線激發(fā)，熒光檢測到650nm以上。 盡管7-AAD的發(fā)射強度低于碘化丙錠（PI），但由于光譜重疊小，因此與其他488 nm激發(fā)的熒光染料（如FITC和PE）相結合，更長的發(fā)射波長使其更適用于多重測定。

染色細胞分析方案

        通常7-AAD染色的染色在細胞染色的最后一步，并且它只能染死細胞。 以下程序適用于大多數(shù)細胞類型。 生長培養(yǎng)基，細胞密度，細胞類型和其他因素可能會影響染色。玻璃器皿上的殘留洗滌劑也可能影響許多生物的染色，導致在沒有細胞存在的溶液中出現(xiàn)明亮染色的物質。

1）制備1-10mM DMSO儲備溶液。如果儲存在-20°C，DMSO儲備液可以保存6個月。

2）使用適合您樣品的固定方案。

3）通過離心沉淀細胞，并將細胞重懸于緩沖鹽溶液或培養(yǎng)基中，在pH 7.4下進行最佳染料染色。 培養(yǎng)物中的貼壁細胞可以在蓋玻片上或細胞培養(yǎng)孔中原位染色。

4）使用0.5至5μM的濃度添加7-AAD染色，并將其孵育15至60分鐘。

注意：在最初的實驗中，最好在整個建議的范圍內嘗試幾種染料濃度，以確定產生最佳染色的濃度。

5）在Ex / Em = 545 / 650nm處測量熒光強度（使用FL3進行流式細胞分析）

注意：7-AAD是一種潛在的致癌物質。 建議用戶戴上手套，防護服和眼睛/面部保護裝置，以免接觸皮膚和眼睛。