活性氧（ROS）是含氧的化學反應性分子（如超氧化物，羥基，單線態(tài)氧和過氧化物）。由于存在不成對的價電子，ROS具有高反應性。 ROS形成氧的正常代謝的天然副產(chǎn)物，并且在細胞信號傳導和體內平衡中具有重要作用。然而，在環(huán)境壓力（例如，UV或熱暴露）期間，ROS水平可顯著增加。這可能導致細胞結構的顯著損害。累積地，這被稱為氧化應激。 ROS也由外源性源如電離輻射產(chǎn)生。在氧化應激條件下，ROS產(chǎn)生顯著增加，導致隨后膜脂，蛋白質和核酸的改變。這些生物分子的氧化損傷與衰老以及各種病理事件有關，包括動脈粥樣硬化，致癌作用，缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病。細胞滲透性ROS Brite APF和HPF試劑是非熒光的并且在與羥基自由基或過氧亞硝酸根陰離子反應時產(chǎn)生亮綠色熒光（激發(fā)/發(fā)射= 490 / 515nm），APF也將與次氯酸根陰離子（OCl-）反應。此外，APF和HPF在過氧化物酶存在下也與過氧化氫反應。可以使用熒光成像，高內容成像，微孔板熒光測定法或流式細胞術測量所得熒光。 APF和HPF顯示出對光誘導氧化的相對高的抗性。 APF和HPF在與羥基或過氧亞硝酸根陰離子反應之前是非熒光的。

ROS Brite 染料的分析方案

該方案僅提供指南，實際應根據(jù)您的具體需求進行修改。在制備ROS Brite 工作溶液之前，根據(jù)需要處理細胞。

1）在DMSO中制備10至20mM ROS Brite APF（或HPF）儲備溶液。通過將DMSO儲備溶液稀釋到含有20mM Hepes緩沖液（HHBS）的Hanks溶液中，制備1至10μM的工作溶液。

2）根據(jù)需要處理細胞（例如，用50-100nM血管緊張素II處理RASM細胞3-5小時）。

3）用ROS Brite APF（或HPF）（1-10μM，步驟＃1）在37℃孵育細胞20-60分鐘。

4）用HHBS緩沖液替換染料加載溶液。

5）用適當?shù)臒晒鈨x器在Ex / Em = 490 / 525mm（截止= 515nM）下用底部讀取模式分析細胞（例如，用于熒光顯微鏡的FITC濾光片，用于流式細胞儀的FL1濾光片）。

注意：BSA和酚紅會影響熒光，應謹慎使用。 APF和HPF均可用于溶液測定或細胞內測量。